Казахстан: Плохая вакцина - «подруга» ящура

18 апреля 2014 г.12:31

Казахстан: Плохая вакцина - «подруга» ящура

Ящур стал эпизоотией №1 для ВКО после отмены обязательной вакцинации в РК в 2010 году. На такое кардинальное решение в республике пошли после принятия Программы по развитию экспортного потенциала мяса КРС до 2020 года. Дело в том, что вакцинированные животные, если исходить из международных стандартов, для этих целей не очень-то подходят.

Как известно, одним из диагностических признаков ящура является наличие в крови больных животных неструктурных белков. Такой же «след» оставляла и трехвалентная неочищенная вакцина, которая в республике использовалась для иммунизации скота. Потому определить после, по какой именно из причин они там «объявились», практически невозможно. Естественно, про вывоз такой продукции придется забыть. А ведь животноводство в РК, как ни крути, является одной из самых экспортоориентированных отраслей. Чтобы повысить ее потенциал, в МСХ и рубанули с плеча.

Однако для Казахстана, со всех сторон окруженного соседями, у которых не все благополучно с опасными заболеваниями животных, такое простое решение вопроса оказалось неприемлемым. Особенно, когда у тебя, как в ВКО, под боком Китай. Там регулярно происходят вспышки ящура, однако КНР не сотрудничает с МЭБ, и получить официальную информацию оттуда - на грани фантастики. По крайней мере, перед Казахстаном Поднебесная уж точно отчитываться не собирается.

В результате за два последовавших за отменой обязательной вакцинации года в ВКО по причине ящура утилизировали более 3 тыс. голов КРС и около 6 тыс. голов овец. На фоне этого, а также обращений фермеров МСХ провело несколько консультаций с экспертами МЭБ. Те, на месте изучив ситуацию, порекомендовали применять для иммунизации домашнего скота очищенную вакцину. Такой препарат не оставляет после своего применения неструктурный след.

В 2013 году в ведомстве приняли решение, что против ящура будет провакцинировано все поголовье в буферных зонах, в число которых входит ВКО, ЮКО и Алматинская область. Поставленная задача в районах была выполнена. Однако в июне в ВКО вспышка ящура была зафиксирована среди вакцинированного скота.

Следует отметить, что на профилактику и ликвидацию ящура и других опасных эпизоотий, а также на нужды ветеринарии области выделяются немалые деньги из республиканского бюджета. Прошедший год не стал исключением. Так что же, деньги были выброшены на ветер?

Ответом на вопрос стала проверка прокуратуры ВКО, показавшая, насколько эффективно использованы госсредства ветслужбой на местах в 2013 году и за три первых месяца текущего. Заодно прокуроры выяснили, как в области вообще соблюдают закон о ветеринарии. Об результатах рассказали на брифинге в надзорном органе, где присутствовала и собкор ИА «Казах-Зерно».

Вот так вакцина!

В 2013 году ВКО для вакцинации КРС против ящура получила, как показала проверка, около 1 800 000 доз неочищенной вакцины «Азия-1» трехвалентного типа «А,О» на общую сумму почти 141 миллион тенге. Препарат был произведен Степногорским ТОО «Вита-СТ». Оно же стало и поставщиком, а заказчиком по закупкам препарата - Комитет ветконтроля и надзора МСХ РК.

- Урджарскому и Тарбагатайскому районам было выделено 148 тысяч доз вакцины. Весь КРС там прошел иммунизацию. Однако в мае и июне в этих районах произошли вспышки ящура. В ходе проведенных противоэпизоотических мероприятий было уничтожено 2 326 голов инфицированного КРС. При этом на ликвидацию очагов заболевания из республиканского бюджета выделено более 1,2 млрд тенге, - сообщил старший помощник прокурора области Нурбулан Макулбаев.

Причину такого почти нулевого эффекта от вакцинации установили лабораторные исследования КРС на напряженность иммунитета. Они показали, что из 3677 животных иммунитет выработался только среди 105, или у 2,8%, как говорится, без комментариев. К тому же иммунизацию провели с опозданием, так как результаты первых конкурсов по закупу вакцины Генеральной прокуратурой РК были опротестованы, как незаконные.

Вирус не дремлет

Для ликвидации последствий вспышки ящура и проведения повторной вакцинации в очаге инфекции пришлось закупать сорбированную, моно- и поливалентную вакцину в городе Владимире Российской Федерации. За утилизированный скот его владельцам было выплачено более 293 млн. тенге.

Также выяснилось, что в апреле в приграничной с ВКО провинции Синьцзян, как следует из официального сообщения Всемирной Организации Здоровья Животных, была вспышка ящура. Спустя несколько недель вирус проник в ВКО. Некачественная вакцина оказалась плохой защитой против заразы. Вирус могли привезти с собой переселенцы из Китая, а также их родственники с той стороны.

- Как показали результаты проверки и анализа, основными причинами распространения ящура на территории области являются отсутствие профилактической вакцинации против ящура, которая нужно проводить два раза в год, не дожидаясь заражения животных, и применение неэффективной вакцины. В этой связи прокуратура области предлагает внести изменения и дополнения в Закон РК «О госзакупках» с тем, чтобы осуществлять закупки ветеринарных препаратов (вакцины) без применения норм закона, инициировать вопрос о возобновлении практики обязательной профилактическую иммунизацию против ящура. В настоящий момент готовится письмо в Генеральную прокуратуру РК, где мы предлагаем внести изменений и дополнения в законодательные акты по вопросу профилактики болезней животных, - сообщил начальник первого управления прокуратуры Рустам Шидердинов.

По принципу «шаляй-валяй»

В ходе прокурорских проверок был выявлен ряд нарушений, которые также могут стать той ложкой дегтя, которой под силу испортить любое эпизоотическое благополучие.

Например, установлены факты, когда должностные лица областной территориальной инспекции КВКиН МСХ РК скрывали случаи, подозрительные на заболевание животных ящуром. В конце сентября 2013 г. в акимат Курчумского района поступило сообщение от ветврачей КГКП «К

По этой статье комментариев нет. Обсудить новость

Вакцинация против ящура мрс

» Вакцинация

На месте первичного проникания вирус очень стремительно репродуцируется и уже через 24-36 ч создает первичные афты, которые нередко остаются незамеченными. Иммунизация крс вакциной из инактивированного вируса индуцирует. С учетом этого меры борьбы с ящуром в различных странах можно поделить на четыре направления.

Наблюдается общая слабость, боль в голове, увеличение температуры тела до 39,5-40,2 с, слюнотечение. Сразу на предприятии проводят мероприятия, как в ящурном очаге. Мясо, субпродукты и другие продукты их убоя разрешается использовать без ограничения, но исключительно в границах области (края), республики.

Проведение прививок и широкопланових противоэпизоотических мероприятий значимым образом оказывает влияние на закономерности появления и проявления этой очень небезопасной заболевания животных. По применению вакцины ящурной культуральной моно-и поливалентной.Вакцина против ящура инактивированная сорбированная моновалентная из вируса, выращенного в клеточках внк-21 в комбинации.Выбракованная вакцина особых мер по уничтожению не просит, неопасна для животных, человека и среды. В неблагополучных и угрожающих относительно ящуру хозяйствах свиней независимо от возраста ревакцинують единовременно через 6 мес.

Если инактивированную поливалентную гоа-вакцину против ящура и живую против чумы вводить сразу подкожно в область шейки с различных сторон, то.С аннотацией по использованию хоть какой из предложенных вакцин.Предупредительные надписи использовать подкожно - крс, буйволам. Шприцы и иглы стерилизуют кипячением, место введения вакцины обеззараживают 70 брутальным спиртом. В ветеринарном свидетельстве должно быть обозначено, когда животные переболели ящуром и когда снят карантин с хозяйства.

Вна в сыворотке крови возникают к концу первой недели, добиваются наибольшего титра в 3-5 недель, потом их концентрация равномерно понижается. При появлении первичного ящурного очага на местности рф исцеление нездоровых животных не проводят.

ПО ПРИМЕНЕНИЮ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ ЯЩУРА

МОНОВАЛЕНТНОЙ ТИПА A, ТИПА O, ТИПА C, ТИПА АЗИЯ-1

(ИЗ ВИРУСА, ВЫРАЩЕННОГО В КЛЕТКАХ ВНК-21)

1. Общие положения

1.1. Моновалентная вакцина предназначена для профилактической иммунизации крупного рогатого скота, яков, буйволов, овец и коз против ящура, вызванного одним из серотипов A, O, C, Азия-1.

1.2. Моновалентная противоящурная вакцина изготовлена из вируса ящура, выращенного в суспензии клеток ВНК-21/2-17, сорбированного на гидроокиси алюминия, инактивированного формальдегидом с добавлением сапонина.

Для изготовления препарата используют один из следующих штаммов вируса

ящура. A. O. C, Азия -1.

По внешнему виду это жидкость светло-желтого цвета, с рыхлым, легко разбивающимся при встряхивании белым осадком, образующимся на дне флакона (при хранении).

1.3. Флаконы с вакциной должны быть герметично укупорены и снабжены этикетками, на которых указано наименование предприятия-изготовителя и его товарный знак, наименование препарата, количество препарата во флаконе, номер серии и госконтроля, дата изготовления (месяц, год), срок годности, условия хранения, обозначение технических условий, доза вакцины.

1.4. Вакцина пригодна для применения в течение 12 мес. после изготовления при соблюдении условий хранения и транспортирования.

Вакцину против ящура моновалентную типа A, типа O. типа C, типа Азия-1

на предприятии-изготовителе, в организациях Союзглавзооветснабпрома и у

потребителя хранят в сухом, темном и закрытом помещении при температуре 4 -

8 °С. Вакцина, подвергавшаяся замораживанию и в результате этого утратившая

коллоидные свойства и способность давать при встряхивании флакона

гомогенную устойчивость взвеси гидроокиси алюминия, к использованию

непригодна и подлежит выбраковке.

1.5. При наличии в вакцине посторонних примесей, хлопьев, плесени, при нарушении целости флакона, отсутствии этикетки, а также при неиспользовании препарата в день открытия флакона вакцина подлежит уничтожению.

2. Методика применения вакцины

2.1. Вакцину вводят строго подкожно крупному рогатому скоту, якам и буйволам в области средней трети шеи, овцам и козам - с внутренней стороны бедра в дозах, указанных на этикетках флаконов.

2.2. При проведении прививок необходимо соблюдать правила асептики и антисептики.

На месте введения вакцины поверхность кожи тщательно дезинфицируют 70-процентным раствором этилового спирта. Шприцы и иглы перед применением стерилизуют кипячением; для каждого животного используют отдельную иглу.

3. Порядок применения вакцин

3.1. Вакцину применяют с профилактической целью и вынужденно в неблагополучном пункте и в угрожаемой по ящуру зоне при уточнении типа вируса.

3.2. В хозяйствах, где вакцину данного серотипа ранее не применяли, иммунизируют всех животных независимо от возраста, а также нарождающийся в течение месяца молодняк.

Ревакцинацию проводят через 2 мес. а затем взрослое поголовье иммунизируют через каждые 6 мес. после первой прививки, молодняк до 18-месячного возраста - через каждые 3 мес. после второй прививки.

3.3. Иммунитет у первично привитых животных наступает к 21-му дню, причем при соблюдении интервалов между ревакцинацией и последующими иммунизациями иммунитет к данному серотипу поддерживается постоянно.

3.4. Молодняк, родившийся от иммунизированных животных, вакцинируют с 4-месячного возраста, а в последующем по п. 3.2 настоящего Временного наставления.

4. Наблюдение за привитыми животными

4.1. За привитыми животными устанавливают наблюдение, имея в виду, что у части таких животных на месте введения вакцины отмечается местная реакция, проявляющаяся в виде небольшой болезненной припухлости, которая через 5 - 10 дней исчезает.

Общая реакция организма может проявляться в виде кратковременного повышения температуры тела на 1 - 2 °С в течение 1 - 3 сут.

4.2. Животным, у которых при ревакцинации наблюдается аллергическая реакция, вводят антигистаминовые препараты (димедрол, адреналин, атропин сернокислый, кофеин и др.).

4.3. В случае осложнений, возникших после введения вакцины, об этом немедленно сообщают Всесоюзному ордена Трудового Красного Знамени государственному научно-контрольному институту ветпрепаратов Минсельхоза СССР (123022, Москва, Д-22, Звенигородское шоссе, 5) и биопредприятию. изготовившему вакцину.

В соответствии с указанием Главного управления ветеринарии Минсельхоза СССР от 08.09.1982 О порядке предъявления рекламации на биопрепараты одновременно во ВГНКИ с нарочным направляют не менее 3 флаконов вакцины, помещенных в термос с температурой 2 - 8 °С. и сопроводительным документом, в котором указывают количество вакцинированных и заболевших животных, характер осложнений, результат типизации вируса, эпизоотическую обстановку по ящуру и другие данные, характеризующие течение заболевания.

12 декабря 2013

В Урюпинском районе продолжает сохраняться напряженная ситуация по особоопасным заболеваниям животных. Вновь ужесточились карантинные мероприятия по африканской чуме свиней. И полным ходом идут профилактические мероприятия по недопущению заболеваемости скота ящуром.

С 28 ноября вновь запрещено торговать на рынках свининой и продуктами свиноводства. Вызвано это тем, что в Нехаевском и ряде других близлежащих районах выявлена вспышка АЧС среди диких свиней.

В. Фирсанова, начальник Урюпинской районной СББЖ комментирует, что ящур от нас пока относительно далеко, но нужно быть готовым к его приходу. Вспышки этой инфекции, которой подвержен в основном крупный и мелкий рогатый скот в последнее время регистрируется регулярно, в целом ряде регионов страны, а так же в Казахстане, с которым граничит наша область. Учитывая высокую скорость распространения, надо надежно защититься от этого заболевания — провести вакцинацию всего поголовья. К сожалению, в этом вопросе ветспециалисты сегодня сталкиваются просто с дремучим невежеством хуторян, которые приравнивают ящур к АЧС и говорят о том, что скоро вслед за свиньями начнется и ликвидация коров. Приходится убеждать и доказывать, что в отличии от чумы свиней, от которой не существует вакцины, по ящуру проводится надежная вакцинация. И сегодня мы уже работаем именно с вакциной, эффективной против разновидности вируса ящура, вызвавшего последние эпизоотии в нашей стране. Поэтому всем владельцам КРС и МРС необходимо предоставить скот на прививки. Молодняк прививается с четырехмесячного возраста четыре раза в год, взрослый скот — два раза. В условиях угрозы эпизоотии вакцинация проводится внепланово. Особо отмечу — вакцина предоставляется бесплатно.

Тем же, кто не захочет участвовать в этой кампании, напомню, что в соответствии со ст. 18 Закона РФ О ветеринарии владельцы животных несут полную ответственность за соблюдение ветеринарно-санитарных правил при содержании и заболевания животных. За их нарушение виновные лица могут подвергаться штрафу или привлекаться к уголовной ответственности. Подобные примеры в нашем районе уже есть.

Ветеринарная служба района продолжает работать в напряженном режиме, проводятся сходы, раздаются ветеринарные памятки. Но без помощи владельцев скота, поставить надежный барьер инфекции, будет крайне сложно.

Источник: администрация Урюпинского муниципального района

Источники: http://lookatvladivostok.ru/proektory/nomer1720.html, http://uristu.com/library/sssr/usr_12659/, http://vlg-media.ru/novosty-partnerov/v-uryupinskom-raione-prodolzhaetsja-vakcinacija-krs-i-mrs-ot-jaschura-23684.html

Комментариев пока нет!

? Как правильно делать прививки В этой статье хотелось бы дать несколько советов тем, кто готов делать обязательные

Правда ли, что врачи не делают своим детям и внукам прививки? 28 августа 2012 в 13:02 Ответ для tinkler Если все вокруг привиты - значит

Прививка от скарлатины: когда делают детям Скарлатина — это инфекционное заболевание, которым обычно болеют дети, хотя и у взрослых она иногда встречается. Возбудителем

Развитие современной медицины характеризуется поистине впечатляющими темпами. Совсем недавно на суд пациентов было представлено новое диагностическое средство, способное стать

прививка дифтерия столбняк Из-за чего же это Больно этого больно сгибать ногу в лет, я подвернул ногу, Neuvita-Nuga Best Leipzig - Истории выздоровления Слышал неутешительное-.

— Подскажите, пожалуйста, могут ли отказать принять ребенка в дошкольное учреждение, если у него не сделаны все.

Сообщения: 9 Зарегистрирован: Вт мар 19, 2013 16:25 Откуда: Украина Крым Здравствуйте. А у меня вопрос такой - может кто-то знает, можно.

Вакцина против ящура типа а инактивированная сорбированная - патент РФ 2526570 - Лозовой Дмитрий Анатольевич, Михалишин Валерий Васильевич, Михалишин

Лозовой Дмитрий Анатольевич (RU). Михалишин Валерий Васильевич (RU). Михалишин Дмитрий Валерьевич (RU). Стариков Вячеслав Алексеевич (RU). Лёзова Татьяна Николаевна (RU). Борисов Алексей Валерьевич (RU). Юрчишин Василий Дмитриевич (RU). Смоленский Владимир Иванович (RU). Уласов Валентин Ильич (RU)

Федеральное государственное бюджетное учреждение "Федеральный центр охраны здоровья животных" (ФГБУ "ВНИИЗЖ") (RU)

публикация патента:
27.08.2014

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и касается вакцины против ящура типа А. Вакцина содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером № 2045/Киргизия/2007-ДЕПА № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в перевиваемой культуре клеток ВНК-21, представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура, адъюванты гидроокись алюминия с сапонином и поддерживающую среду в эффективных соотношениях. Вакцина обладает высокой иммуногенностью и способна обеспечить эффективную защиту от возбудителя инфекции ящура, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока. 11 з.п. ф-лы, 14 табл. 1 ил, 4 пр.

Изобретение относится к области ветеринарной вирусологии и биотехнологии и может быть использовано при разработке и изготовлении вакцины против ящура типа А инактивированной сорбированной.

Ящур - это острое контагиозное вирусное заболевание парнокопытных животных. Для него характерна тенденция к широкому распространению и эпизоотическому течению. Болезнь сопровождается большими потерями молока, мяса и других видов животноводческой продукции, затрудняет коммерческие операции и хозяйственную деятельность. Для обеспечения устойчивого благополучия страны по ящуру в Российской Федерации реализуется система мероприятий, приоритетными в которой являются предупреждение заноса вируса ящура на территорию, а в районах высокой степени риска - вакцинопрофилактика. В настоящее время в Российской Федерации и странах СНГ для иммунизации крупного и мелкого рогатого скота против ящура применяют, как правило, инактивированные сорбированные, а для иммунизации свиней - инактивированные эмульсионные вакцины [1].

Технология изготовления противоящурной вакцины из инактивированного вируса начинается с подбора производственных штаммов на основе эпизоотологического анализа динамики ящура в стране и сопредельных государствах. При создании препаратов для специфической профилактики используют соответствующие типы вируса ящура и подбирают штаммы с широким антигенным спектром внутри типа с выраженной перекрестной иммуногенностью. Штамм с широким спектром иммуногенности и удовлетворяющий требованиям региона выбирают с помощью его испытания в реакции перекрестной защиты или чаще в реакции перекрестной нейтрализации. Как правило, в качестве производственного штамма используется популяция вируса, которая в совокупности с системой и условиями промышленного культивирования обеспечивает гарантированное и высокое накопление 146S и 75S компонентов вируса и получение иммуногенной вакцины.

Кроме того, к производственному штамму предъявляются требования стабильности вируса в процессе очистки от тканевых компонентов и концентрирования, а также сохранения вируса при инактивации и длительном его хранении [2].

Возбудитель ящура обладает значительной антигенной вариабельностью штаммов в пределах одного серотипа, которая выявляется в различные временные промежутки и на разных территориях и зависит от видового состава восприимчивого поголовья, его иммунного статуса и множества других различных факторов. Антигенная изменчивость вируса ящура обусловлена заменами аминокислот в полипептидных фрагментах (антигенных эпитопах), экспонированных на поверхности капсидных белков [2, 3]. Сдвиги антигенного спектра, соответствующие обновлению структуры нового полевого штамма, могут варьировать от незначительных, улавливаемых моноклональными антителами, до существенных, регистрируемых с помощью традиционных поликлональных иммуноглобулинов. Существенные изменения антигенных характеристик природного штамма с большой вероятностью вызывают ослабление специфического иммунитета, индуцированного негомологичным антигеном. Они вызывают также затруднения штаммоспецифической диагностики.

В результате возникает необходимость создания новых средств диагностики и специфической иммунопрофилактики.

Известны штаммы вируса ящура типа А, использовавшиеся в качестве производственных на территории СССР и РФ в течение последних 50 лет.

К ним относятся следующие штаммы: А₇ № 103, выделенный в 1962 году в Куйбышевской области; А ₇ № 2, выделенный в 1965 году в Таджикской ССР; А № 717/73, выделенный в 1973 году в Ставропольском крае.

Указанные штаммы использовались для получения диагностикумов и противоящурных вакцин, применявшихся в различных регионах страны.

Однако после ликвидации ящура, вызываемого близкими им в антигенном отношении штаммами вируса, они были сняты с производства и в настоящее время поддерживаются лишь в коллекции штаммов микроорганизмов ФГБУ «ВНИИЗЖ» [1÷4].

Известна вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа А, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из гомологичного возбудителю инфекции штамма A ₂₂ № 550, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъюванта и поддерживающей среды в эффективном соотношении [5].

Штамм А₂₂ № 550 вируса ящура выделен в 1964 году в Азербайджане и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах постсоветского пространства [6, 7].

Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A, выделенного в 1999 году в Республике Грузия [8].

Известна инактивированная сорбированная вакцина из штамма № 1707 «Армения-98» вируса ящура Aphtae epizooticae типа А [9].

Вакцина против вируса ящура типа A из производственного штамма A № 1707 «Армения-98», применявшегося в буферной зоне Закавказья.

Недостатки вакцин, изготовленных из данных штаммов, состоят в недостаточной антигенной и иммуногенной активности относительно эпизоотических изолятов вируса ящура типа A, циркулирующих в настоящее время в странах Закавказья, Центральной Азии и Ближнего Востока (Турция, Иран и т.д.) ввиду имеющихся существенных антигенных отличий.

Наиболее близкой предлагаемому изобретению по совокупности существенных признаков является вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A, содержащая активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721, полученного в чувствительной биологической системе, и целевые добавки в виде адъювантов ГОА с сапонином и поддерживающую среду в соотношении, мкг:

Штамм A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП выделен в 1999 году в Республике Грузия и используется в Российской Федерации в качестве производственного при изготовлении средств специфической профилактики и диагностики, применяемых на всей территории России и в странах СНГ [10].

В качестве чувствительной биологической системы используют суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды - раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,6.

Для очистки вируссодержащей суспензии от балластных примесей используют полигексаметиленгуанидин (ПГМГ), а для инактивации вируса - аминоэтилэтиленимин (АЭЭИ). Для нейтрализации АЭЭИ в суспензию добавляют тиосульфат натрия.

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A (Грузия) 1999/ № 1721 представляет собой суспензию преимущественно из 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура. В качестве адъювантов используют ГОА с сапонином.

Основной недостаток известных вакцин, в том числе и вакцины-прототипа, состоит в антигенных отличиях от изолятов вируса ящура типа A, выделенных в различные временные промежутки, и приготовленные на их основе вакцины обеспечивают эффективную защиту животных только против заражения гомологичным вирусом.

В 2003 году на территории Ирана был выделен новый изолят вируса ящура типа A, значительно отличающийся от ранее изученных штаммов этого типа. В течение 2005÷2006 гг. ящур типа A получил широкое распространение в странах Западной Азии - Иране, Турции, Саудовской Аравии и Пакистане. В феврале 2006 года ящур типа A линии Иран/05 попал во Фракию - европейскую часть Турции, которая граничит с Болгарией и Грецией. Проведение 100% вакцинации всех жвачных с применением штамма A₂₂ во Фракии в феврале-марте 2006 г. предотвратило распространение ящура в соседние Грецию и Болгарию, однако через 3÷4 месяца появились свежие случаи заболевания [11].

В связи с этим возникла необходимость получить новую вакцину против вируса ящура серотипа A из штамма А № 2045/Киргизия/2007 для обеспечения безопасности территории России и сопредельных государств от этого возбудителя.

В задачу создания настоящего изобретения входила разработка вакцины противоящурной инактивированной сорбированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Технический результат от использования предлагаемого изобретения заключается в расширении арсенала инактивированных сорбированных вакцин против ящура типа A.

Указанный технический результат достигнут созданием вакцины против ящура типа A инактивированной сорбированной, охарактеризованной следующей совокупностью признаков.

Предлагаемая вакцина содержит в 1 см 3 препарата: активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученного предпочтительно в суспензионной культуре клеток ВНК-21 в количестве не менее 3,0 мкг и целевые добавки: ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг, сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг и поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг.

Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП выделен в 2007 году в Республике Киргизия. Штамм получен путем многократных последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток. Штамм адаптирован к первично трипсинизированным клеткам свиной почки и перевиваемым клеточным культурам ВНК-21, IBRS-2 и ПСГК-30.

Для изготовления вакцины в качестве чувствительной биологической системы используют предпочтительно суспензионную культуру клеток ВНК-21, а в качестве поддерживающей среды раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8.

Для инактивации вируса используют АЭЭИ, который добавляют в вируссодержащую суспензию до концентрации 0,025÷0,05%. По окончании инактивации АЭЭИ нейтрализуют внесением в суспензию тиосульфата натрия [12].

Полученный антиген очищают от балластных примесей с помощью ПГМГ, который вносят в суспензию до концентрации 0,005÷0,007% [13].

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП представляет собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура.

Количественное и качественное содержание вирусного сырья определяют методом турбидиметрии [14].

Для приготовления вакцины используют вирусный материал, содержащий в 1 см 3 не менее 0,5 мкг 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура.

Необходимую концентрацию 146S и 75S иммуногенных компонентов вируса ящура в предлагаемой вакцине, составляющую не менее 3 мкг в 1 см 3 готового препарата, получают путем добавления в авирулентный и очищенный антигенный материал расчетного количества адъюванта-сорбента ГОА. Оптимальным является содержание ГОА в 1 см 3 готового препарата в диапазоне от 11000,0 мкг до 15000,0 мкг.

К полученному концентрату добавляют дополнительно 10% водный раствор сапонина из расчета 1500,0 мкг на прививную дозу. Например, для оптимальной прививной дозы 2 см 3 конечная концентрация составляет 0,075%, что соответствует 750,0 мкг его содержания в 1 см 3 готового препарата.

Полученная вакцина представляет собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.

Предлагаемое изобретение включает следующую совокупность существенных признаков, обеспечивающих получение технического результата во всех случаях, на которые испрашивается правовая охрана.

1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная.

2. Активное вещество в виде авирулентного и очищенного антигенного материала из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП в эффективном количестве.

3. Целевые добавки.

Признаками изобретения, характеризующими предлагаемую вакцину и совпадающими с признаками прототипа, в том числе родовое понятие, отражающее назначение, являются:

1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная.

2. Активное вещество.

3. Целевые добавки.

По сравнению с вакциной-прототипом существенным отличительным признаком предлагаемой вакцины является то, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A в эффективном количестве.

Предлагаемое изобретение характеризуется также другими отличительными признаками, выражающими конкретные формы выполнения или особые условия его использования.

1. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

2. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

3. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

4. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

5. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант-сорбент ГОА.

6. ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

7. В качестве целевой добавки вакцина содержит адъювант сапонин.

8. Сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

9. В качестве целевой добавки вакцина содержит поддерживающую среду.

10. Поддерживающая среда в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

11. Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг:

Антигенный материал не менее

Предлагаемая вакцина обладает высокой иммуногенной активностью и обеспечивает надежную защиту против вируса ящура серотипа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Достижение технического результата от использования изобретения достигается тем, что в состав предлагаемой вакцины введен в качестве активного вещества антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа A, обладающего высокой биологической, антигенной и иммуногенной активностью в нативном виде и после инактивации и обеспечивающего получение противоящурной вакцины сорбированной инактивированной, создающей эффективную защиту восприимчивых животных против вируса ящура серотипа A, вызывающего вспышки заболевания в последние годы в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 является новым, ранее неизвестным [15]. Исходный вирус для получения штамма A № 2045/Киргизия/2007 был выделен из проб афтозного материала от больной телки, поступивших в ФГУ «ВНИИЗЖ» в декабре 2007 года из Республики Киргизия (экспертиза № 2045 «Киргизия/07»). Производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A получен путем последовательных пассажей на чувствительных гетеро- и гомологичных культурах клеток.

Полученный штамм депонирован 7 июля 2009 года во Всероссийскую государственную коллекцию штаммов микроорганизмов, используемых в ветеринарии и животноводстве, Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственный центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ») под регистрационным номером (ссылкой): производственный штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП вируса ящура типа A характеризуется следующими признаками и свойствами.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП относится к семейству Picornaviridae, роду Aphtovirus, серотипу A и обладает морфологическими признаками, характерными для возбудителя ящура: форма вириона икосаэдрическая, размер 23-25 нм. Вирион состоит из молекулы РНК, заключенной в белковую оболочку. Белковая оболочка состоит из 32 капсомеров, расположенных в кубической симметрии.

По своим антигенным свойствам штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура относится к серотипу A. Вирус стабильно нейтрализуется гомологичной антисывороткой. Вирус не проявляет гемагглютинирующей активности (ГА-активности). У переболевших животных в сыворотке крови образуются антитела, выявляемые в иммуноферментном анализе (ИФА) и реакции микронейтрализации (РМН). При иммунизации КРС вакциной из инактивированного вируса индуцирует образование специфических антител, выявляемых в ИФА, РДП и РМН.

При гипериммунизации морских свинок концентрированный антиген из инактивированного вируса ящура типа A штамма A № 2045/Киргизия/2007 индуцирует образование вирусспецифических и вируснейтрализующих антител, выявляемых в РСК в разведениях 1:80÷1:160 и в ИФА в разведениях 1:10000÷1:12000.

Антигенное родство штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A с производственным штаммом вируса ящура A₂₂ № 550 и штаммами, ранее выделенными на Азиатском континенте, изучено в РСК, ИФА и РМН.

Результаты исследований в РСК представлены в таблице 1. Антигенное родство (R) штамма A № 2045/Киргизия/2007 с другими вирусами ящура серотипа A составило для A/Иран/97 - 8%, A₂₂ /Ирак 24/64 - 28%, A/Иран/05 - 68%, A/Турция/06 - 66%, A₂₂ № 550 - 14%.

Результаты исследований в РМН представлены в таблице 2. Антигенное соответствие (r₁ ) составило для A/Иран/97 - 0,125, A₂₂ № 550 - 0,17, A₂₂ /Ирак 24/64 - 0,6, A/Турция/06 - 0,5. При значении r₁ >0,3 полевой изолят и производственный штамм являются близко родственными, и вакцина из производственного штамма будет защищать от эпизоотического вируса, при значении r₁ <0,3 полевой изолят отличается от производственного штамма, и вакцина из данного штамма не защищает от эпизоотического вируса [16].

Результаты исследований в ИФА представлены в таблице 3. Антигенное соответствие (r₁ ) составило для A₂₂ № 550 - 0,24, A₂₂ /Ирак 24/64 - 0,24, A/Иран/97 - 0,19, A/Турция/06 - 0,5. При значении r_1, равном 0,4÷1,0, полевой изолят и производственный штамм находятся в близком антигенном родстве; при значении r₁ 0,2÷0,39 полевой изолят антигенно родственен производственному штамму, вакцина из производственного штамма может быть использована, если не будет найдено более родственного штамма, и при условии, что животные будут иммунизированы более 1 раза; при значение r₁ <0,2 полевой изолят отличается от производственного штамма, вакцина из которого не приемлема для защиты от заражения полевым вирусом [17].

Методом нуклеотидного секвенирования была определена первичная структура гена VP₁ вируса ящура типа A штамма А № 2045/Киргизия/2007 и выведена первичная структура белка VP_1. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A имеет близкое филогенетическое родство со штаммами A/Иран/05 и A/Турция/06 (процент нуклеотидных различий 3,82÷4,3 и 4,46÷5,57 соответственно) и значительно отличается от вакцинного штамма A₂₂ № 550. Кроме того, он отличается от штаммов вируса этого типа, выделенных в 1998 г. в Армении и Турции, а также в Грузии и Иране в 1999 г. (смотри дендрограмму). Степень нуклеотидных различий последовательностей штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A со штаммами вируса ящура серологического типа A составила: со штаммом A₂₂ № 550 - 18,15%, со штаммом A № 1707 «Армения-98» - 17,68%, со штаммом A/Турция/98 - 17,2%, со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721 - 18,79%, со штаммом A/Иран/99 - 17,68%.

Таким образом, филогенетический анализ показал, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A принадлежит к новой генетической линии вируса ящура серологического типа A.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 репродуцируется в монослойной культуре клеток почки свиньи (СП), перевиваемых культурах клеток ПСГК-30, ВНК-21 и IB-RS-2, и в течение 20÷24 часов инкубирования урожай вируса в указанных культурах клеток достигает значений от 6,33 до 8,25 lg ТЦД₅₀ -/см 3 (таблица 4). При массированном заражении (1÷10 ТЦД/клетку) вызывает ЦПД через 5 часов. Сохраняет исходные характеристики при пассировании в клеточных культурах на протяжении 10 пассажей (срок наблюдения).

Хемо- и генотаксономическая характеристика

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A является РНК-содержащим вирусом с молекулярной массой 7×10 6 Д.

Нуклеиновая кислота представлена одноцепочечной линейной молекулой молекулярной массой 2,8×10 6 Д. Вирион имеет белковую оболочку, состоящую из четырех основных белков VP₁. VP₂. VP₃ и VP₄. Липопротеидная оболочка отсутствует.

Основным антигенным белком является VP₁. В вирионе содержится приблизительно 31,5% РНК и 68,5% белка. Вирионная РНК является инфекционной и участвует в образовании белков-предшественников в инфицированных клетках. Предшественники, в свою очередь, расщепляются с образованием более стабильных структурных и неструктурных полипептидов вируса. Из 8 неструктурных полипептидов, накапливающихся в инфицированных клетках, один (BP_56a ) является РНК-зависимой РНК-полимеразой, участвующей в репликации РНК новых вирионов.

Масса вириона составляет 8,4×10 -18 г. Коэффициент седиментации 146S в градиенте сахарозы. Плавучая плотность 1,45 г/см 3 .

Устойчивость к внешним факторам

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 устойчив к эфиру, хлороформу, фреону, ацетону и другим органическим растворителям и детергентам. Наиболее стабилен при pH 7,2÷7,6. Сдвиги pH как в кислую, так и в щелочную сторону ведут к инактивации вируса.

Чувствителен к формальдегиду, УФ-облучению, -облучению, высоким температурам.

Дополнительные признаки и свойства

Иммуногенная активность - иммуногенен в составе инактивированной вакцины.

Реактогенность - реактогенными свойствами не обладает.

Патогенность - патогенен для парнокопытных животных, новорожденных мышат, морских свинок.

Вирулентность - вирулентен для естественно восприимчивых животных при контактном, аэрозольном и парентеральном заражении.

Стабильность - сохраняет исходные биологические свойства при пассировании в чувствительных биологических системах в течение 10 пассажей.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A проявляет высокую биологическую, антигенную и иммуногенную активность как в нативном виде, так и после инактивации.

Исходя из полученных данных, можно утверждать, что штамм A № 2045/Киргизия/2007 по антигенному и иммунологическому спектрам является оригинальным, в таксономическом отношении новым, ранее неизвестным вариантом вируса ящура типа A.

Для снижения его эпизоотической опасности необходима своевременная вакцинопрофилактика вновь возникающих очагов болезни, для чего необходимы актуальные высокоиммуногенные вакцины.

Проведенный заявителем анализ уровня техники, включающий поиск по патентным и научно-техническим источникам информации, и выявление источников, содержащих сведения об аналогах предлагаемого изобретения, позволил установить, что заявитель не обнаружил источники, характеризующиеся признаками, тождественными (идентичными) всем признакам предлагаемого изобретения. Определение из перечня выявленных аналогов прототипа, как наиболее близкого по совокупности признаков аналога, позволило установить совокупность существенных по отношению к усматриваемому заявителем техническому результату отличительных признаков предлагаемой вакцины, изложенных в независимом пункте формулы.

Следовательно, заявляемая вакцина соответствует уровню патентоспособности «новизна».

Для проверки соответствия предлагаемой вакцины условию патентоспособности «изобретательский уровень» проведен дополнительный поиск известных решений для выявления признаков, включенных в отличительную часть независимого пункта формулы изобретения. Результаты поиска показали, что предлагаемое решение не вытекает для специалиста явным образом из известного уровня техники, изложенного в соответствующем разделе описания (не выявлены решения, имеющие признаки, совпадающие с отличительными признаками предлагаемого изобретения), а также не выявлено влияние предусматриваемых существенными признаками предлагаемой вакцины преобразований для достижения технического результата.

Следовательно, предлагаемая вакцина соответствует условию патентоспособности «изобретательский уровень».

Сущность изобретения пояснена в перечнях последовательностей, в которых:

SEQ ID NO:1 представляет последовательность нуклеотидов гена белка VP₁ штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.

SEQ ID NO:2 последовательность аминокислот белка VP₁ штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A.

Сущность изобретения пояснена на дендрограмме, отражающей филогенетические взаимоотношения штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серологического типа A с эпизоотическими и вакцинными штаммами вируса ящура типа A. Дендрограмма основана на сравнении полных нуклеотидных последовательностей гена VP₁ .

Сущность предлагаемого изобретения пояснена примерами его использования, которые не ограничивают объем изобретения.

Штамм A № 2045/Киргизия/2007 вирус ящура типа A был изолирован из полевого материала, поступившего в ФГУ «ВНИИЗЖ» в виде эпителия афт от КРС, подозреваемого в заболевании ящуром, при проведении лабораторной диагностики этого заболевания и дифференциации его от других везикулярных болезней. При изоляции вируса использован комплекс биологических, вирусологических и биохимических методов.

Биологические и вирусологические методы включали инокуляцию материала полевого изолята КРС и последующую адаптацию вируса к культурам первично трипсинизированных и перевиваемых линий клеток. Были использованы культуры клеток СП, ПСГК-30, IB-RS-2 и ВНК-21. Первичные и перевиваемые культуры клеток для постановки биопробы выращивали на соответствующих питательных средах в стационарных условиях во флаконах емкостью 50÷100 см 3. отмывали от ростовой среды и заражали 10% суспензией афтозного материала (множественность заражения составляла 1÷10 ТЦД₅₀ на клетку), приготовленной в растворе Хенкса с 0,5% ГЛА и антибиотиками по стандартной рецептуре. Для удаления микрофлоры и балластных клеточных компонентов суспензию обрабатывали хлороформом в отношении 1:10. После 30-минутного инкубирования при 37°C во флаконы вносили по 5÷10 см 3 поддерживающей среды и инкубировали при 37°C до появления ЦПД вируса. При наличии ЦПД (округление клеток, повышение их оптической плотности, дегенерация и отделение клеток от стекла) флаконы подвергали замораживанию-оттаиванию, очистке клеточной взвеси хлороформом и центрифугированию при 3000g в течение 15 минут. Полученный вируссодержащий материал использовали для последующих пассажей и исследования в РСК и ИФА на наличие вирусного антигена, при этом использовали набор коммерческих типоспецифических сывороток и сыворотки, хранившихся в музее штаммов ФГУ «ВНИИЗЖ».

Результаты адаптации вируса к различным клеточным культурам представлены в таблице 4.

Данные, приведенные в таблице 4, свидетельствуют о хорошей адаптационной активности штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A к использованным клеточным культурам.

Изолированный с помощью перечисленных методов вирус был исследован в РСК с набором диагностикумов на все типы вируса ящура, с целью идентификации типовой принадлежности.

Результаты типирования вируса в РСК представлены в таблице 5.

Приведенные в таблице 5 результаты свидетельствуют о том, что выделенный вирус относится к типу A.

Вакцину против ящура типа A инактивированную сорбированую готовят из вируса штамма A № 2045/Киргизия/2007, выращенного в суспензионной культуре клеток ВНК-21. В качестве поддерживающей среды используют раствор Эрла без сыворотки с добавлением ФГМС, ГБКС и антибиотиков при pH 7,4÷7,8. Культуру клеток заражают вирусом из расчета 0,001÷0,05 ТЦД₅₀ на клетку.

Культивирование вируса ведут при температуре 36÷37°C. Через 11÷13 часов инкубирования проводят подсчет живых и мертвых клеток при окраске трипановым синим. Если количество живых клеток составляет 15÷20%, то инкубирование продолжают еще 2÷3 часа. При достижении количества мертвых клеток 90÷95% культивирование прекращают и вируссодержащую суспензию контролируют на стерильность и содержание 146S и 75S компонентов. Количество 146S+75S компонентов в суспензии должно составлять не менее 0,5 мкг/см 3 .

В таблицах 6, 7, 8 и 9 приведены результаты культивирования штаммов A № 2045/Киргизия/2007, A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП, A № 1707 «Армения-98-ДЕП» и A₂₂ № 550 вируса ящура типа A, из которых следует, что культуральные свойства перечисленных штаммов существенно отличаются по двум изученным параметрам:

1) штамм A № 2045/Киргизия/2007 имеет более короткий период репродукции (12,5 часа) по сравнению со штаммом A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (15÷16 часов);

2) штаммы A № 2045/Киргизия/2007 и A₂₂ № 550 дают более высокий процент выхода иммуногенных компонентов (90,1% и 89,9% соответственно) по сравнению со штаммами A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП и A № 1707 «Армения-98-ДЕП» (61,5% и 58,1% соответственно).

Сразу по окончании цикла репродукции вируса, не прекращая термостатирования, в вируссодержащую суспензию добавляют 15÷20% раствор АЭЭИ, подкисленный ледяной уксусной кислотой до pH 8,0÷8,5. Конечная концентрация АЭЭИ в вируссодержащей суспензии должна быть равной 0,025÷0,05%. Инактивацию инфекционности вируса проводят в течение 12÷24 часов при 36÷37°C и pH 7,2÷7,6 с перемешиванием через 5÷6 часов в течение 3÷5 минут. Остаток АЭЭИ нейтрализуют добавлением тиосульфата натрия.

В теплую суспензию добавляют 10% раствор ПГМГ до концентрации 0,005÷0,007% для флокуляции балластных примесей и инактивации возможных контаминантов. Флокулированные балластные примеси подвергают седиментации с последующей декантацией.

В таблице 10 приведены результаты исследований по изучению влияния инактивации и очистки антигенного материала с помощью АЭЭИ и ПГМГ на иммуногенные (146S и 75S) компоненты вируса ящура штаммов A № 2045/Киргизия/2007 и A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП.

Приведенные в таблице 10 данные свидетельствуют о том, что иммуногенные компоненты вируса ящура штамма A № 2045/Киргизия/2007 не уступают в устойчивости к инактивации и очистке в условиях производства вирусу ящура штамма A (Грузия) 1999/ № 1721-ДЕП. Особенно важным является тот факт, что в процессе инактивации и очистки вируса из штамма A № 2045/Киргизия/2007 не произошло существенных изменений в количестве 146S и 75S компонентов, полученных при репродукции вируса.

Полученный антиген контролируют на авирулентность, содержание вирусспецифического белка, 146S и 75S компонентов вируса и стерильность. Необходимую концентрацию 146S и 75S компонентов в прививной дозе адсорбированной вакцины получают путем концентрирования антигена ГОА.

Расчетный объем ГОА 3% концентрации добавляют в охлажденную суспензию антигена при работающей мешалке. Перемешивание ведут в течение 30 минут. После седиментации ГОА сливают расчетный объем оставшейся суспензии. Конечная концентрация ГОА должна быть в пределах 1,62±0,488 Р<0,01 мг/см 3 n=10, а концентрация 146S и 75S компонентов вируса ящура, по меньшей мере, 3,0 мкг/см 3 готового препарата. Затем в суспензию добавляют дополнительно 10% раствор сапонина до конечной концентрации 0,05÷0,15%, что соответствует 500,0÷1500,0 мкг сапонина в 1 см 3 готовой вакцины.

Полученную вакцину расфасовывают в стеклянные флаконы и проводят контроль ее стерильности в соответствии с ГОСТ 28085.

Авирулентность и безвредность вакцины проверяют на 5 головах КРС, вводя вакцину сначала под слизистую языка в дозе 2,0 см 3. а затем подкожно в дозе 10,0 см 3. Наблюдение за клиническим состоянием животных ведут в течение 10 суток. Авирулентную, безвредную и стерильную вакцину проверяют на иммуногенную активность на КРС или на морских свинках.

Полученная вакцина представляют собой жидкость светло-желтого цвета с рыхлым белым осадком сорбента, который образуется на дне флакона при хранении и легко разбивается в гомогенную взвесь при встряхивании.

Оптимальный компонентный состав полученной адсорбат-вакцины против ящура типа A приведен в таблице 11.

Проведены испытания адсорбат-вакцины против ящура типа A, изготовленной так, как описано в примере 2, и содержащей, мкг:

Авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура типа A

Авирулентность и безвредность полученной вакцины проверили на 5 головах КРС. Препарат вводили каждому животному под слизистую языка в дозе 2,0 см 3. а затем подкожно в дозе 10,0 см 3. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели в течение 10 суток после заражения.

По окончании контроля на авирулентность и безвредность вакцину проверили на иммуногенную активность. Испытание провели на 5 головах КРС массой 250÷300 кг и 5 головах телят массой 70÷80 кг. Адсорбат-вакцину вводили подкожно в дозе 2,0 см 3. Контрольное заражение проводили гомологичным штаммом вируса ящура на 28 день после вакцинации (ДПВ) для телят и на 90 день для быков. Результаты исследований представлены в таблицах 13÷14.

Приведенные в таблицах 13÷14 данные показали, что заболел 1 бык из 5 голов, а 4 были защищены от генерализации процесса на 90 день после вакцинации а, все 5 голов телят были защищены от генерализации процесса на 28 день после вакцинации. Уровень гуморального иммунитета у привитых животных на момент заражения составил 5,00±0,27 log₂ для быков и 6,20±0,63 log₂ для телят, что свидетельствует об эффективности испытанной вакцины.

Таким образом, приведенная выше информация свидетельствует о выполнении при использовании предлагаемой вакцины следующей совокупности условий:

вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, воплощающая предлагаемое изобретение, предназначена для использования в сельском хозяйстве, а именно в ветеринарной вирусологии и биотехнологии;

- для предлагаемого изобретения в том виде, как оно охарактеризовано в независимом пункте формулы изобретения, подтверждена возможность его осуществления с помощью приведенных в заявке или известных до даты приоритета средств и методов;

вакцина против ящура типа A сорбированная инактивированная, изготовленная из штамма A № 2045/Киргизия/2007 в соответствии с предлагаемым изобретением, обладает высокой иммуногенной активностью и способна обеспечить эффективную защиту восприимчивых животных против эпизоотического вируса ящура типа A, циркулирующего в странах Закавказья, Центральной Азии, Ближнего и Дальнего Востока.

1. Bojko A. A. Declaration sur I apparition en URSS d un type virus aphteux different des souches de type A anterieurement etudiees dans le Pays. BOIE, 1965, 64, V. 2. - P. 1075-1077.

2. Pepep X. Ящур: пер. с нем./ Г.А.Сурковой; под ред. и с предисл. П.В. Малярца. - М. Колос, 1971. - 432 с.

3. Ящур: монография / А.Н. Бурдов, А.И. Дудников, П.В. Малярец [и др.]. - М. Агропромиздат, 1990. - 320 с.

4. Вирусные болезни животных / В.Р. Сюрин, А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев [и др.]. - М. ВНИИТИБП, 1998. - С.532-548.

5. Временная инструкция по изготовлению и контролю противоящурной концентрированной гидроокись алюминиевой формолвакцины из лапинизированного вируса A₂₂. Утверждена ГУВ СССР 25.03.1971 г.

6. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура типов A, O, C, Азия-1, Сат-1, Сат-2 и Сат-3 инактивированной сорбированной моно- и поливалентной (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 216 с.

7. Промышленный регламент на производство вакцины против ящура инактивированной эмульсионной моно- и поливалентной для профилактики ящура свиней (из вируса, выращенного в клетках ВНК-21): утв. Директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 11.09.2009. - Владимир, 2009. - 240 с.

8. Пат. РФ 2294760, МПК A61K 39/135, Вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа A/ В.В. Михалишин, Т.Н. Лезова, А.В. Щербаков, Д.В. Михалишин, Н.С. Мамков; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 21.12.2004; опубл. 10.06.2006 г. (прототип).

9. Пат. РФ 2140452, МПК A61K 39/135, Штамм N 1707 "АРМЕНИЯ-98" вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов/ В.М. Захаров, В.К. Спирин, А.И. Гриценко [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 15.03.1999; опубл. 27.10.1999 г.

10. Пат. РФ 2242513, МПК A61K 39/135, Штамм A (ГРУЗИЯ) 1999/ № 1721 вируса ящура типа A для изготовления диагностических и вакцинных препаратов; ФГУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 24.11.2003; опубл. 20.12.2004 г.

11. Foot-and-mouth Disease. Sitiation worldwide and major epidemiological events in 2005-2006/ K. Sumption, J. Lubroth, T. Murrai, S. De la Rocque// Empress/Focus on. - 2007. - № 1.

12. Пат. РФ 594771, МПК A61K 39/12, Средство для инактивации вирусов при изготовлении противовирусных препаратов/ Н.А. Улупов, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий, Д.С.Жук; ВНИЯИ - Заявл. 07.05.1973; опубл. 07.07.93 г.

13. Пат. РФ 2054039, МПК A61K 39/135, Способ очистки и стерилизации культурального вируса ящура/ Т.Н. Лезова, Н.А. Улупов, В.В. Борисов, В.В. Михалишин, А.И. Дудников, П.А. Гембицкий; ВНИЯИ - Заявл. 07.02.1992; опубл. 10.02.1996 г.

14. Авт.свид. СССР 784335, C12Q 1/02, Способ определения качества вирусного сырья/ А.Ф. Бондаренко; ВНИЯИ - Заявл. 04.07.1979; опубл. 20.03.2000 г.

15. Пат. 2451745 Российская Федерация, МПК A61K 39/135, Штамм A 2045/Киргизия/2007 вируса ящура Aphtae epizooticae типа A для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа A/ Е.В. Белик, В.В. Борисов, А.В. Щербаков, С.Р. Кременчугская [и др.]; ФГБУ «ВНИИЗЖ» - Заявл. 26.07.2010; опубл. 27.05.2012 г.

16. OIE. Manual of diagnostic Tests and Vaccines for Terrestrial animals (Mammals, Birds and Beers). - 6 th ed. - Paris, 2008. - Vol.1.- P 203÷207.

17. Selection of foot and mouth disease vaccine strains - a review/ D.J. Paton, J.F. Valacher, J. Bregman [et al.]// Rev. Sci. Techn. OIE. -2005. - Vol.24, № 3. - P. 981÷993.

Антигенный спектр штамма А № 2045/Киргизия/2007 вируса ящура серотипа А по данным РСК

1. Вакцина против ящура типа A инактивированная сорбированная, содержащая активное вещество и целевые добавки, отличающаяся тем, что в качестве активного вещества она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма вируса Aphtae epizooticae, сем. Picornaviridae, рода Aphtovirus, серотипа A, депонированного в коллекции ФГУ «ВГНКИ» под регистрационным номером производственный штамм вируса ящура серотипа A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, в эффективном количестве.

2. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный в чувствительной биологической системе и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

3. Вакцина по п.2, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток животного происхождения и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

4. Вакцина по п.3, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A.

5. Вакцина по п.4, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A в количестве не менее 3,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

6. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант-сорбент гидроокись алюминия (ГОА).

7. Вакцина по п.6, отличающаяся тем, что она содержит ГОА предпочтительно в количестве 11000,0÷15000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

8. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит адъювант сапонин.

9. Вакцина по п.8, отличающаяся тем, что она содержит адъювант сапонин предпочтительно в количестве 500,0÷1500,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

10. Вакцина по п.1, отличающаяся тем, что в качестве целевой добавки она содержит поддерживающую среду.

11. Вакцина по п.10, отличающаяся тем, что она содержит поддерживающую среду в количестве до 1000000,0 мкг в 1 см 3 готового препарата.

12. Вакцина по любому из пп.1-11, отличающаяся тем, что она содержит авирулентный и очищенный антигенный материал из штамма A № 2045/Киргизия/2007-ДЕП, полученный предпочтительно в перевиваемой культуре клеток ВНК-21 и представляющий собой суспензию, содержащую преимущественно 146S и 75S иммуногенные компоненты вируса ящура типа A, ГОА, сапонин и поддерживающую среду в соотношении, мкг:

способ изготовления вакцины против ящура - патент 2522868 (20.07.2014)

применение этония в качестве адъюванта для производства сорбированной противоящурной вакцины - патент 2521513 (27.06.2014)

полиэпитопный белок, нуклеотидная последовательность, кодирующая полиэпитопный белок, плазмида с последовательностью, кодирующей полиэпитопный белок, и препарат полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура - патент 2467014 (20.11.2012)

состав полиэпитопного белка для индукции иммунного ответа против вируса ящура - патент 2453557 (20.06.2012)

штамм а 2045/киргизия/2007 вируса ящура aphtae epizooticae типа а для контроля антигенной и иммуногенной активности противоящурных вакцин и для изготовления биопрепаратов для диагностики и специфической профилактики ящура типа а - патент 2451745 (27.05.2012)

способ изготовления инактивированной эмульгированной вакцины против гриппа птиц и вакцина инактивированная эмульгированная против гриппа птиц - патент 2358760 (20.06.2009)

способ изготовления вакцины против ящура и вакцина против ящура - патент 2332233 (27.08.2008)

штамм азия-1/таджикистан/2004(1960) вируса ящура типа азия-1 для изготовления диагностических и/или вакцинных препаратов - патент 2297452 (20.04.2007)

вакцина инактивированная сорбированная против ящура типа а - патент 2294760 (10.03.2007)

вакцина инактивированная эмульсионная против ящура типа а - патент 2294759 (10.03.2007)

холодоадаптированный штамм вируса гриппа в-в/виктория/2/63/87, предназначенный в качестве штамма-донора аттенуации для получения реассортантов холодоадаптированных штаммов для живой гриппозной вакцины - патент 2529772 (27.09.2014)

штамм "г 244/11" вируса блютанга 14 серотипа для вирусологических исследований, изготовления вакцинных и диагностических препаратов - патент 2528057 (10.09.2014)

флавивирус с двухкомпонентным геномом и его использование - патент 2527891 (10.09.2014)

поликатионное соединение "тривирон (triviron)" и способ его получения - патент 2527256 (27.08.2014)

аттенуированный рекомбинантный парвовирус, пригодный для защиты собак от инфицирования парвовирусом - патент 2527157 (27.08.2014)

кодон-оптимизированная кднк, кодирующая дисферлин человека, генно-инженерная конструкция, рекомбинантный аденовирус и фармацевтическая композиция для лечения дисферлинопатий - патент 2527073 (27.08.2014)

способ оценки противооспенной активности лечебно-профилактических препаратов - патент 2526504 (20.08.2014)

способ удаления вируса иммунодефицита человека из спермы мужчины - патент 2526494 (20.08.2014)

набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченого зонда для видоспецифичной экспресс-идентификации рнк вируса хунин методом полимеразной цепной реакции в реальном времени - патент 2525938 (20.08.2014)

набор олигонуклеотидных праймеров и флуоресцентномеченого зонда для видоспецифичной экспресс-идентификации рнк вируса мачупо методом полимеразной цепной реакции в реальном времени - патент 2525937 (20.08.2014)